乙肝设计酶，未来开发前景，应识别各种HBV及最小脱靶效应

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乙肝设计酶，未来开发前景，应识别各种HBV及最小脱靶效应

医药研发技术和新药研究息息相关，新的设计酶CRISPR/Cas9 RNA引导的核酸酶系统引起了科学家的兴趣，这是一种提供直接攻击乙肝病毒基因组的先进技术，我们就来谈谈乙肝病毒和CRISPR/Cas9近几年所遇到的一些技术路径问题和潜力。

乙肝设计酶，未来开发前景，应识别各种HBV及最小脱靶效应

乙肝病毒（HBV），是嗜肝病毒科的成员之一，嗜肝病毒科是具有松弛环状DNA（rcDNA）基因组的小型非细胞病变病毒家族。当感染后，rcDNA基因组在感染细胞的细胞核中，转化成为了共价闭合环状DNA（cccDNA）。乙肝病毒把人类当成了其唯一的天然宿主，几乎只感染肝细胞。

HBV基因组，包含4个重叠的开放阅读框（ORF），它们通过使用替代起始密码子编码7种病毒蛋白。HBV X（HBx），它是HBV编码蛋白之中最小的，存在所有的哺乳动物嗜肝病毒当中。HBx通常被认为是一种非结构蛋白，而且已经被科学家证明，在HBV生命周期、病毒-细胞相互作用以及HBV相关的HCC中发挥着多种功能意义！

难点：当我们了解HBV主要结构以后，以现有抗病毒药物还无法治愈HBV感染。因为要想成功根除HBV，则需要灭活病毒基因组，该基因组主要以游离共价闭合环状DNA（cccDNA）形式，存在于宿主细胞之中，在较小程度上，会以染色体整合序列的形式存在。

尚待解决问题：对设计核酸酶的未来开发应用前景，必须能够识别各种乙肝病毒基因型，并且可以导致最小的脱靶效应才行。包膜HBV的基因组，包含一个环状、部分双链DNA，它是使用逆转录酶从RNA中间体合成。目前为止，科学家已经发现了HBV基因组中，有8种主要基因型（A至H），在HBV感染细胞中，病毒遗传信息，就是人们熟知的以cccDNA（共价闭合环状DNA）形式存在附加体中，在人类基因组中以整合DNA形式存在着，上面也有提到。

而且这种病毒库还特别持久，让HBV治疗变得相当困难。现有主要有两种被科学家认可的方法，即干扰素-α和核苷（酸）类似物。干扰素-α，主要有价格昂贵，可能会导致严重不良反应等；核苷（酸）类似物通常需要长期甚至终身给药，并且可能会发生基因逃逸突变。

多数核苷（酸）类似物可以接近病毒抑制，但还不能从体内完全地消除HBV，这主要是因为乙肝病毒DNA也是肝细胞DNA的一个组成部分。药物研发人员要想开发设计出，完全治愈HBV感染，就必须根除或至少大量减少受到感染肝细胞中的cccDNA。

小番健康结语：到目前为止，只关注到，要想实现大量减少感染肝细胞中cccDNA的方法，可能会和其他在研新药物结合使用，比如免疫调节剂、小分子抗病毒抑制剂、RNAi等等。科学家在过去几年中，已经至少开发了三种新技术，比如锌指核酸酶 (ZFN)、转录激活因子样效应核酸酶 (TALEN)和最近人们热议的CRISPR/Cas9 RNA引导的核酸酶系统。

潜力：实际上，科学家已经在不同的测试系统中，通过使用ZFNs、TALENs和CRISPR/Cas9，实现了对HBV的直接抗病毒作用。但是，正如最近小番健康介绍的，这些新技术还有一些技术路径问题没有解决，除了核酸酶的最佳传递与循环HBV毒株中最理想靶位点保护，以及潜在的脱靶效应的高度相关问题。

这是一种好的潜在直接靶向cccDNA方法，但科研人员还要解决上述问题，才可能实现药物从临床前进入临床研究。

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